Header

Shop : Details

Shop
Details
978-3-8191-0072-7
44,85 €
ISBN 978-3-8191-0072-7
220 pages
37 figures
German
Thesis
June 2025
eBook (PDF)
Oliver Birrenbach
Prozessentwicklung zur Produktion rekombinanter Proteinaggregate in Yarrowia-Hefen
Entwicklung eines Verfahrens zur rekombinanten Produktion und Produktaufarbeitung von Proteinaggregaten mit Restaktivität
Proteinaggregate werden häufig als unerwünschte Nebenprodukte der rekombinanten Proteinbiosynthese betrachtet, können jedoch aufgrund ihrer einfachen Isolierbarkeit aus Zelllysaten und potenziell erhaltener enzymatischer Aktivität biotechnologisch von Interesse sein. Ziel der Arbeit war die Etablierung eines systematischen Prozesses zur gezielten Produktion aktiver Proteinaggregate in Yarrowia lipolytica. Hierfür wurde eine modulare Vektorbibliothek mit 29 Kombinationen aus pull-down-tags und Zielproteinen konstruiert und genomisch in Y. lipolytica PO1f integriert.
Für die Kultivierung wurde ein neuartiges, chemisch definiertes ISY-Medium entwickelt, das im Vergleich zu etablierten Medien eine Verdopplung der Wachstumsraten ermöglichte. Die mittels TDoT-tag gezielt unlöslich exprimierte Uricase konnte aus der unlöslichen Zellfraktion isoliert werden und wies bei einer Konzentration von 0,331 mg·L⁻¹ eine hohe spezifische Aktivität von 39,3 U·mg⁻¹ auf. Zur Erhöhung der Produktivität wurde ein fed-batch-Bioreaktorprozess mit wachstumsadaptiver Steuerung auf Basis eines Generic Model Control-Algorithmus unter Einsatz von Softsensoren implementiert. Die Kultivierung erfolgte entlang vorgegebener Wachstumsraten. Bei der Aufreinigung von Proteinaggregaten aus Zelllysaten führte eine Vorklärung bei pH 8 unter Zusatz von 0,0051 % Chitosan zu einer Reduktion zellulärer Partikel um >95 %. Im anschließenden Ultrafiltrationsprozess mit einer 50 nm keramischen Rohrmembran wurde limitierendes Membranfouling beobachtet. Eine Modellierung zeigte eine intermediäre Porenverstopfung, die konzentrations- und druckabhängig war.
Es wurde eine vielseitige Plattform zur molekularbiologischen Konstruktion, Prozessführung und Aufreinigung aktiver Proteinaggregate in Y. lipolytica etabliert.
Keywords: Aktive Proteinaggregate; Yarrowia Hefen; in-silico yeast medium; Uricase; GMC-Regler; keramische Membranen; Membranfouling
Other formats
Print version: 978-3-8440-9997-3
DOI 10.2370/9783819100727
You need Adobe Reader, to view these files. Here you will find a little help and information for downloading the PDF files.
Please note that the online documents cannot be printed or edited.
Please also see further information at: Help and Information.
 
 DocumentDocument 
 TypePDF 
 Costs44,85 € 
 ActionDownloadPurchase in obligation and download the file 
     
 
 DocumentTable of contents 
 TypePDF 
 Costsfree 
 ActionDownloadDownload the file 
     
User settings for registered online customers (online documents)
You can change your address details here and access documents you have already ordered.
User
Not logged in
Share
Shaker Verlag GmbH
Am Langen Graben 15a
52353 Düren
Germany
  +49 2421 99011 9
Mon. - Thurs. 8:00 a.m. to 4:00 p.m.
Fri. 8:00 a.m. to 3:00 p.m.
Contact us. We will be happy to help you.
Captcha
Social Media